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活力碘對柯薩奇A24型及脊髓灰質病毒的滅活效果觀察

[  修改時間:2013-2-17 15:33:06  瀏覽次數:2340]
 

活力碘對柯薩奇A24型及脊髓灰質病毒的滅活效果觀察

同濟醫科大學協和醫院病毒研究室

活力碘(聚吡咯酮碘)為聚吡咯酮與碘的絡合物,它是一種廣譜消毒劑,國外已廣泛應用于醫藥、食品及環境衛生等消毒,并有取代其它消毒劑的趨勢。我們對武漢生產的活力碘消毒劑進行了實驗觀察,以了解它對腸道病毒的滅活效果,現將結果報告如下:

材料與方法

1、消毒劑:活力碘(聚吡咯酮碘)有效碘含量為0.9%9000PPM)。

2、病毒:脊髓灰質炎病毒(POL0Mahoneg株。武漢市防疫站贈。柯薩奇

A24型(Co×A24)新加坡EH24/70株,為沙市防疫站贈,與消毒劑作用的病毒液在人胚肺細胞上繁殖產生完全細胞病變所收獲的細胞培養液。

3、細胞:人胚肺二倍細胞(本室自傳第24代)。細胞培養于含1%小牛血清Eagie’s培養液中。

4、微量中和實驗:方法參見文獻1即將100JTCID50/0.1ml的病毒量加入劑不同稀釋的消毒劑,作用不同時間后,采集樣品,每個樣品加入相應濃度的硫代硫酸鈉中和劑,以終止反應,經處理的樣品接種道96孔板人胚肺細胞上培養7天,觀察是否出現細胞病變。若完全不出現細胞病變表示無病毒繁殖,病毒被滅活。

5ELISA夾的法:方法參見文獻2

即將Co×A24雞免疫血清已被40孔聚乙烯板,加經消毒劑滅活的Co×A24抗源。3711/2小時3×3ˊ→加含Co×A24抗體的人血清37C1小時→3×3ˊ洗→加羊抗人辣根過氧化物酶結合物37C1小時→洗→加底物37C15ˊ加終止劑→測OD值。

6ELISA阻斷實驗(中和實驗),為證實ELISA法的可靠性特異性,幫進行阻斷實驗。即取Co×A24免疫血清與待檢樣品混均為和組,另取磷酸緩沖液加待檢樣品混均為實驗組

2組分別取0.1ml加到已包被有Co×A24的微孔中,其余方法同ELISA法。

1、用微量中和法檢測活力碘對Co×A24POLIOI型病毒滅活作用,由表可見31PPM

5分鐘即可完全滅活100TCID50含量的Co×A24病毒。62PPm若加大Co×A24病毒量至100010000TCID50,則62PPm作用5分鐘滅活效果微弱。但若將消毒劑濃度再加大10倍則有可能完全滅活更大劑量病毒,需作進一步觀察。

2、為了近一步佐證活力碘的滅活效果,我們同時應用ELISA夾心法檢測滅活Co×A24

毒的效果,由表2可見,含活力碘1.8PPm(即將原液稀釋5000)2.5分鐘即可滅活300TCID50Co×A24病毒。經阻斷實驗證明這種滅活作用是特異性的。若病毒溶液中含有其它有機物質是否影響消毒劑的效果呢?我們將病毒液中加入10%牛血清,結果表明存在有機物條件下1.8PPm活力碘則需5分鐘可完全滅活病毒。

3、活力碘在不同PH條件下對病毒的滅活效果:(見表3)結果表明在PH567的情

下不影響其滅活效果。

4、活力碘的穩定性:

將活力碘稀釋110后(含900PPm)儲存417天測完全滅活病毒的作用,用ELISA

檢測,若將活力碘用蒸餾水稀釋(PH6—6.55000倍置于4儲存3—5天不影響其滅活效

果,但若儲存20天則完全失去滅活病毒的作用。

用微量中和法檢測活力碘對Co×A24POLIOI型病毒滅活作用

有效碘濃度 抗原濃度

125PPm 100 TCID50

62PPm 100 TCID50

62PPm 1000 TCID50

62PPm 10000 TCID50

31PPm 100 TCID50

16PPm 100 TCID50

8PPm 100 TCID50

Co×A24滅活效果

POLIOI型滅活效果

5 10 15 20 30(min)

- - - - -

- - - - -

±(未 測)

(未 測)

- - - - -

++ ++ + ± ±

+++ +++ +++ +++ +++

2 5 10 15 20 30(min )

( )

- - - - - -

(未 測)

(未 測)

+++ +++ ++ ± - -

++++ ++++ ++++ ++++ ++++

(未 測)

病毒對照 100 TCID50

表示活力碘完全滅活病毒,+ - +++ 表示不同程度抑制病毒,++++表示完全不能滅活病毒,病毒仍大量繁殖。

在活力碘濃度高于250PPm時,則對人胚肺細胞有毒性,故最高濃度采用125PPm

用用ELISA法檢測滅活Co×A24病毒的滅活效果

有效碘濃度 抗原濃度

1.8PPm 300 TCID50

3.6PPm 300 TCID50

使

2.5 5 10 20min

- - - -

++ + ± -

陽性抗原對照 300 TCID50 ++ ++ ++ ++

陽性抗原對照 細胞培養液 - - - -

1300稀釋

1.8PPm 300 TCID50 + - - -

(含10%牛血清)

陽性抗原對照組 300 TCID50 +++ +++ +++

(含10%牛血清)

陽性抗原對照組(含10%牛血清) - - - -

表示Co×A24活性<2.1,(P/N)表示滅活作用。注本試劑盒P/N>表示試劑盒實驗能成立

PH活力碘滅活病毒效果的影響(微量中和法)

有效碘濃度

62PPm

62PPm

病毒

Co×A24

100 TCID50

100 TCID50

PH

5 6 7

- - -

- - -

病毒對照

100 TCID50 +++ +++ +++

注:以上為消毒劑作用5分鐘結果。

本實驗證明活力碘是有很強的滅活腸道病毒的作用。若僅稀釋10倍則其性能是穩定的,

可儲存17天,但若稀釋倍數過高則不宜保存,最好臨用前根據不同的用途再進行適當的稀

釋為佳。由于Co×A24是當前全國流行性結膜炎(紅眼病)的病因,因此,活力碘是很有希

望的一種預防紅眼病的消毒劑。總之,活力碘適一種廣效且穩定性好的一種理想消毒劑。

參考文獻

1、董繼華等 病毒學雜志 1987 . 2. P20

2、王有森等 《消毒技術規范》 衛生部公布 1988

 
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